胎牛血清是細胞研究實驗中，常用的試劑之一。在選擇胎牛血清時，盡量挑選內毒素含量低、品質穩(wěn)定，通過質量檢測的產品。Ausbian進口胎牛血清，澳洲血源，內毒素含量≤3EU/ml（標準≤10 EU/ml），通過嚴格的質量檢測，并附有檢測報告。

所有多細胞系統(tǒng)的功能，都是通過細胞回路的動態(tài)和協(xié)調作用來實現的，這些細胞回路會根據環(huán)境信號改變它們的活動。單細胞RNA測序(scRNA-seq)提高了我們以高分辨率和高規(guī)模測量細胞狀態(tài)的能力。

然而，由于該方法的破壞性，scRNA-seq只能在實驗終點捕獲基因表達的靜態(tài)快照，從而從根本上忽略了時間維度。盡管存在這種限制，但在動態(tài)過程中多個時間點的scRNA-seq分析已經為了解無數系統(tǒng)中發(fā)育和分化的轉錄驅動因素提供了見解。計算方法，如偽時間和RNA速度估計，在scRNA-seq實驗中通過基于基因表達相似性的軌跡對細胞進行排序，或通過分別區(qū)分剪接和未剪接的mRNA，來估計基因表達狀態(tài)的時間導數來推斷時間維度。雖然這些方法非常有用，但這些算法工具對用戶定義的參數很敏感，并且缺乏經驗測量的基礎真理，這使得很難測試推斷的結論，特別是在多種軌跡可能共存的復雜體內環(huán)境中。

另外，將scRNA-seq與新mRNA分子的代謝標記相結合，可以更直接地測量基因表達隨時間的變化，并提供對病毒進入、糖皮質激素受體激活和T細胞信號等刺激的快速細胞反應的見解然而，代謝標記目前適合于測量幾個小時內展開的過程，很難應用于體內和跨越多天的分化過程。

在實體腫瘤中，進入腫瘤的免疫細胞受制于并參與支持免疫抑制性腫瘤微環(huán)境(immunosuppressive tumor microenvironment, TME)，其特點是代謝資源和免疫抑制性分泌因子有限。腫瘤內的T和自然殺傷(NK)細胞從功能性細胞毒性狀態(tài)轉變?yōu)楣δ苁д{狀態(tài)，其特征是抑制受體上調，細胞毒性喪失，炎癥細胞因子分泌減少。骨髓細胞，特別是單核細胞，在TME的指導下分化為腫瘤相關巨噬細胞(tam)，產生配體和檢查點，進一步促進T和NK細胞功能障礙，如白細胞介素-10 (IL-10)和轉化生長因子β (TGF-β)。通過對多種小鼠模型和數千例患者樣本中數百萬腫瘤浸潤免疫細胞的scRNA-seq分析，全面表征了癌癥中出現的功能失調和免疫抑制細胞狀態(tài)。然而，盡管取得了這些進展，新滲透的免疫細胞達到這些功能失調狀態(tài)的精確軌跡，所涉及的分子電路以及它們展開的時間尺度仍然模糊不清。實時解決TME中的免疫細胞狀態(tài)轉變需要基因組方法，同時收集單個細胞中的基因表達和時間標記-相對于相關參考框架。

科研人員開始了解功能性免疫細胞如何在浸潤TME后轉變?yōu)楣δ苁д{狀態(tài)。我們開發(fā)了zman -seq，這是一種將時間信息添加到scRNA-seq數據中的體內技術。Zman-seq提供了相對于循環(huán)中應用的熒光團脈沖標簽的免疫細胞組織暴露的經驗時間測量。使用Zman-seq，科研人員重建了膠質母細胞瘤(GBM)的同源原位小鼠模型中免疫細胞狀態(tài)隨時間的進展，膠質母細胞瘤是一種常見的、高度惡性和致命的腦腫瘤，具有異常的免疫抑制TME。Zman-seq解決了腫瘤中的關鍵免疫軌跡，包括細胞毒性NK細胞在約24小時內歸巢到低細胞毒性抗腫瘤活性狀態(tài)和單核細胞到免疫抑制TAMs的進展。此外，它揭示了時間依賴性基因模塊，轉錄因子(TF)電路協(xié)調這些軌跡，以及驅動腫瘤免疫逃避的關鍵時間依賴性受體-配體相互作用事件。

研究人員發(fā)現Trem2 (tam的關鍵分化信號)的表達隨著單核細胞向tam的進展而增加。使用拮抗單克隆抗體阻斷TREM2，將單核細胞分化軌跡重定向到促炎巨噬細胞，表明髓細胞重編程策略可能代表一個有吸引力的免疫治療方向?？傊?，Zman-seq通過實驗將時間戳引入免疫細胞，揭示了大量依賴時間的轉錄組學、信號傳導和細胞-細胞相互作用事件。通過將時間維度引入單細胞轉錄組學數據，Zman-seq為建立具有廣泛適用性的體內多細胞系統(tǒng)動態(tài)模型鋪平了道路。Zman-seq將有助于解決TME的動態(tài)，以開發(fā)下一代免疫療法。